ข้อควรระวังในการทำอิเล็กโทรโฟรีซิสเจลโพลีอะคริลาไมด์

· โพลีอะคริลาไมด์เจลจะต้องมีโมโนเมอร์อะคริลาไมด์ วัสดุเริ่มต้นการเกิดพอลิเมอไรเซชัน ตัวเร่งปฏิกิริยา และส่วนผสมของเกลือและบัฟเฟอร์เข้าด้วยกัน

· อะคริลาไมด์และ BIS (N, N '- เมทิลีน ดับเบิล อะคริลาไมด์) เป็นโมโนเมอร์รูปแบบเมทริกซ์เจล

· แอมโมเนียมเปอร์ซัลเฟตเป็นสารเริ่มต้นกระบวนการโพลีเมอไรเซชันของกาว การกำหนดสูตรกาวต้องใช้สารละลายแอมโมเนียมเปอร์ซัลเฟต 10% ที่เตรียมในน้ำ ข้อมูลส่วนใหญ่ระบุว่าจำเป็นต้องใช้จริง อย่างไรก็ตาม สารละลาย 10% สามารถวางไว้ที่อุณหภูมิ 4℃ ได้นานหลายสัปดาห์โดยไม่สูญเสียกิจกรรมอย่างมีนัยสำคัญ ให้เติมให้ได้ 10 มล. แล้วทิ้งเมื่อกาวไม่สามารถเกาะตัวกันได้

เคล็ดลับ: เปอร์เซ็นต์ของอะคริลาไมด์ในการจัดลำดับกาวและกาวโปรตีนไม่เหมือนกัน หากใช้อะคริลาไมด์สำเร็จรูป: สารละลาย BIS ให้แน่ใจว่าได้ขวดที่ถูกต้อง

· TEMED (N, N, N', N'- tetramethyl ethylenediamine) เป็นตัวเร่งปฏิกิริยาที่อยู่ในขวดสีน้ำตาล วางไว้ในตู้เย็น เติมก่อนเทกาว

· ควรใช้แก้วโพลีอะคริลาไมด์สำหรับอิเล็กโทรโฟเรซิสในการอิเล็กโทรโฟเรซิสก่อนและหลังการใช้งานทุกครั้ง หลังจากอิเล็กโทรโฟเรซิสแล้ว ให้ล้างด้วยแปรงขนนุ่มและผ้าในน้ำสบู่ร้อน ล้างออกด้วยน้ำกลั่น แล้วตากให้แห้ง

· ความชื้นและฝุ่นละอองสามารถเกิดขึ้นได้กับพอลิเมอร์กลวง ก่อนการวิเคราะห์ด้วยอิเล็กโตรโฟเรซิส ให้ทำความสะอาดแผ่นแก้วด้วยน้ำยาทำความสะอาดกระจกและเช็ดด้วยแปรงขนนุ่ม ล้างด้วยน้ำกลั่นและเช็ดให้แห้งสนิทด้วยกระดาษเช็ด ล้างด้วยเอธานอล 70% ก่อนเช็ดด้วยกระดาษช่วยทำความสะอาดและเร่งการแห้ง เติมตัวอย่างอะคริลาไมด์ตามลำดับ: BIS, น้ำ, สารละลายบัฟเฟอร์, แอมโมเนียมเปอร์ซัลเฟต, TEMED เขย่าให้เข้ากันแล้วเททันที

ไม่จำเป็นต้องกำจัดแก๊สโพลีอะคริลาไมด์ก่อนการเกิดพอลิเมอร์ไรเซชัน (เคยวางอะคริลาไมด์ไว้ในสุญญากาศเพื่อกำจัดฟองอากาศ เนื่องจากออกซิเจนจะยับยั้งการเกิดพอลิเมอร์ไรเซชัน)

ตัวอย่างเคล็ดลับจุดกาวแนวนอน

· วางกระดาษสีดำไว้ที่กล่องด้านล่าง พื้นหลังสีดำเพื่อให้มีรูตัวอย่างเพื่อให้มองเห็นได้ชัดเจนขึ้น
· บัฟเฟอร์ที่เติมถังกาว เหนือคอลลอยด์เพียงเล็กน้อย
· หากขอบมีแสง ให้เปิดไฟเพื่อให้แสงส่องไปที่คอลลอยด์ ดึงตัวอย่างใส่ในปิเปต
· โดยใช้เครื่องปิเปตแบบอัตโนมัติ
· สามารถใช้จุดเคลื่อนที่ของของเหลวขนาด 10-200 mu 1 ได้ในจุดส่วนใหญ่บนตัวอย่าง สำหรับรูตัวอย่างขนาดเล็กมาก (น้อยกว่า 10μ1) หัวปิเปตแบบยาวที่ใช้สำหรับการจัดลำดับกาวจะสะดวกกว่า

· การปิเปตโดยจุ่มลงในตัวอย่างโดยสูดดมของเหลวที่เคลื่อนที่ช้าๆ ตัวอย่างอาจดูเหนียวเหนอะหนะด้วยกลีเซอรีน และการสูบอย่างรวดเร็วอาจทำให้ฟองอากาศเข้าไปในหัวปิเปตได้

· ตัวอย่างหลังจากสูดดมหัวปิเปตแล้ว จะเคลื่อนหัวของเหลวเบาๆ บนขอบท่อหรือเช็ดกระดาษดูดหัวของเหลวออกนอกหยด ควรระวังอย่าให้ดูดตัวอย่าง

วางตัวอย่างลงในรูตัวอย่าง

· อุปกรณ์ปิเปตเพื่อรักษาแรงดันให้คงที่ ทำให้หัวของเหลวตัวอย่างเคลื่อนตัวล้นออกมาเล็กน้อย
· สอดหัวปิเปตเข้าไปในบัฟเฟอร์ให้สูงกว่ารูจุดเล็กน้อยเพื่อรักษาแรงดันบวก ปลายปิเปตสามารถสอดเข้าไปในรูเล็กๆ ได้
· ค่อยๆ ดึงตัวอย่างออกมาอย่างสม่ำเสมอ วางปลายปิเปตไว้เหนือรูตัวอย่าง แล้วตัวอย่างจะจมลงไปในรู ปล่อยให้ตัวอย่างจมลงไปเพื่อเติมรูตัวอย่างแทนที่จะดันเข้าไป
· เมื่อหยดสุดท้ายของตัวอย่างมีหัวของเหลว ของเหลวจะเคลื่อนไปที่ขาที่สอง ยกของเหลวขึ้นอย่างช้าๆ เคลื่อนออกจากบัฟเฟอร์

การสุ่มตัวอย่างกาวแนวตั้งทำอย่างไร?

· รูตัวอย่างแบบจุดกาวแนวตั้งที่เกิดขึ้นระหว่างแผ่นแก้วสองแผ่น ในกาวที่บางมาก หัวปิเปตไม่สามารถสอดเข้าไประหว่างแผ่นแก้วสองแผ่นได้ สังเกตกลีเซอรีน! วางหัวปิเปตไว้เหนือรูตัวอย่าง แล้วตัวอย่างจะจมลงไปในรู
· ชี้ตัวอย่างก่อน ให้แน่ใจว่าได้วางจุดแนวตั้งของเจลโพลีโพรพีลีนอะซิลแล้ว รูตัวอย่างจะถูกล้างให้สะอาด ล้างอะคริลาไมด์ที่ยังไม่ผ่านการโพลีเมอร์และน้ำที่อาจปรากฏที่ก้นรูตัวอย่างออกไป น้ำสามารถทำให้รูตัวอย่างมีขนาดเล็กลงอย่างมาก ใช้ไซริงค์ขนาด 25 มล. หรือ 50 มล. และเข็มขนาด 18 เกจ เทบัฟเฟอร์อิเล็กโทรโฟเรซิสลงไป แล้วล้างรูตัวอย่างอย่างระมัดระวัง
· การมองเห็นรูตัวอย่างอาจเป็นเรื่องยาก แต่ในขณะเดียวกัน ส่วนที่เหลือก็ง่าย หากมีรูเกิน สามารถทดสอบบัฟเฟอร์ตัวอย่างด้วยบรอมฟีนอลบลูได้