ข้อควรระวังสำหรับ polyacrylamide gel electrophoresis

· polyacrylamideเจลต้องโดยอะคริลาไมด์โมโนเมอร์วัสดุเริ่มต้นพอลิเมอไรเซชันตัวเร่งปฏิกิริยาและส่วนผสมของเกลือและบัฟเฟอร์เข้าด้วยกัน

· อะคริลาไมด์และ bis (n, n '- methylene double acrylamide) เป็น monomer form gel matrix

·แอมโมเนียม persulfate เริ่มกระบวนการกาวพอลิเมอไรเซชัน การกำหนดของกาวต้องใช้สารละลายแอมโมเนียมเพอร์ซัลเฟต 10% ที่เตรียมไว้ในน้ำ ข้อมูลส่วนใหญ่ระบุถึงความจำเป็นในการใช้งานที่ใช้งานอยู่ อย่างไรก็ตามโซลูชัน 10% สามารถวางไว้ที่ 4 ℃เป็นเวลาหลายสัปดาห์โดยไม่มีการสูญเสียกิจกรรมอย่างมีนัยสำคัญ ทำมากถึง 10 มล. และทิ้งเมื่อกาวล้มเหลวในการรวม

เคล็ดลับ: เปอร์เซ็นต์ของอะคริลาไมด์ในการเรียงลำดับกาวและกาวโปรตีนไม่เหมือนกัน หากใช้ acrylamide premade: การแก้ปัญหา BIS ตรวจสอบให้แน่ใจว่าได้รับขวดที่เหมาะสม

· temed (n, n, n ', n'- tetramethyl ethylenediamine) เป็นตัวเร่งปฏิกิริยาในขวดสีน้ำตาลวางไว้ในตู้เย็น เพิ่มก่อนเทกาว

· electrophoresis polyacrylamide ที่ใช้แก้วในอิเล็กโทรโฟเรซิสควรล้างก่อนและหลังแต่ละครั้ง หลังจากอิเล็กโทรโฟเรซิสให้ล้างด้วยแปรงนุ่มและผ้าในน้ำสบู่ร้อนล้างด้วยน้ำกลั่นและยืนให้แห้ง

·ความชื้นและฝุ่นสามารถทำให้เกิดโพลีเมอร์กลวง ก่อนที่จะใช้อิเล็กโทรโฟเรซิสให้ทำความสะอาดแผ่นแก้วด้วยน้ำยาทำความสะอาดแก้วแล้วเช็ดด้วยแปรงนุ่ม ล้างด้วยน้ำกลั่นและแห้งให้สะอาดด้วยกระดาษเช็ด การล้างด้วยเอทานอล 70% ก่อนเช็ดด้วยกระดาษช่วยทำความสะอาดและเร่งการอบแห้ง เพิ่มตัวอย่างของอะคริลาไมด์อย่างต่อเนื่อง: bis, น้ำ, สารละลายบัฟเฟอร์, แอมโมเนียม persulfate, temed เขย่าให้เข้ากันแล้วเททันที

ไม่จำเป็นต้อง degass polyacrylamide ก่อนการเกิดพอลิเมอไรเซชัน (อะคริลาไมด์เคยถูกวางไว้ในสุญญากาศเพื่อกำจัดฟองเนื่องจากออกซิเจนยับยั้งการเกิดพอลิเมอไรเซชัน)

เคล็ดลับตัวอย่างจุดกาวแนวนอน

·ใส่กระดาษสีดำลงในกล่องด้านล่างพื้นหลังสีดำเพื่อทำหลุมตัวอย่างเพื่อให้เห็นชัดเจนยิ่งขึ้น
·ถังกาวที่เต็มไปด้วยบัฟเฟอร์อยู่เหนือคอลลอยด์
·หากขอบมีแสงไฟเปิดไฟให้แสงส่องเข้ามาคอลลอยด์ วาดตัวอย่างลงในปิเปต
·การใช้อุปกรณ์ปิเปตอัตโนมัติ
·ในจุดเคลื่อนที่ของเหลว 10-200 MU 1 สามารถใช้ในจุดส่วนใหญ่ในตัวอย่าง สำหรับหลุมตัวอย่างขนาดเล็กมาก (น้อยกว่า10μ1) หัวปิเปตยาวที่ใช้สำหรับการเรียงลำดับกาวนั้นสะดวกกว่า

·การปิเปตเพียงแค่แช่ในตัวอย่างสูดดมของเหลวที่เคลื่อนไหวช้า ตัวอย่างอาจปรากฏขึ้นด้วยกลีเซอรีนและการสูบฉีดอย่างรวดเร็วอาจดึงฟองอากาศเข้าสู่หัวปิเปต

·ตัวอย่างหลังจากสูดดมหัวปิเปตจะขยับหัวของเหลวเบา ๆ ที่ขอบของท่อหรือเช็ดกระดาษดูดหัวของเหลวด้านนอกของหยด ระวังอย่าดูดตัวอย่าง

วางตัวอย่างลงในหลุมตัวอย่าง

·อุปกรณ์ปิเปตเพื่อรักษาแรงดันเพียงเล็กน้อยทำให้ตัวอย่างขยับหัวของเหลวล้นเล็กน้อย
·หัวปิเปตใส่เข้าไปในบัฟเฟอร์สูงกว่ารูสปอตเล็กน้อยรักษาความดันในเชิงบวก ปลายของปิเปตสามารถแทรกลงในรูเล็ก ๆ
·ค่อยๆตัวอย่างออกไปอย่างช้าๆ ปลายปิเปตวางอยู่เหนือหลุมตัวอย่างจุดและตัวอย่างจะจมลงในรู ปล่อยให้ตัวอย่างจมเพื่อเติมหลุมตัวอย่างแทนที่จะผลักเข้าไป
·เมื่อหยดตัวอย่างสุดท้ายที่มีหัวของเหลวของเหลวจะย้ายไปที่ขาที่สองค่อยๆยกของเหลวเคลื่อนย้ายออกจากบัฟเฟอร์

วิธีการสุ่มตัวอย่างกาวแนวตั้ง?

·หลุมตัวอย่างกาวแนวตั้งที่เกิดขึ้นระหว่างแก้วสองชิ้น ในกาวที่บางมากหัวปิเปตไม่สามารถใส่ได้ระหว่างแผ่นแก้วสองแผ่น ดูกลีเซอรีน! ใส่หัวปิเปตเหนือหลุมตัวอย่างและตัวอย่างจะจมลงในรู
·ตัวอย่างจุดก่อนหน้าตรวจสอบให้แน่ใจว่าได้วางจุดแนวตั้งของหลุมเจลโพลีโพรพีลีนอะซิลเจลที่สะอาด ล้างอะคริลาไมด์ที่ไม่มีการแข่งขันและน้ำที่อาจปรากฏที่ด้านล่างของหลุมตัวอย่าง น้ำสามารถทำให้หลุมตัวอย่างมีขนาดเล็กลงอย่างมีนัยสำคัญ ใช้เข็มฉีดยาขนาด 25 มล. หรือ 50 มล. และเข็ม 18 เกจ เทลงในบัฟเฟอร์อิเล็กโทรโฟเรซิสและล้างหลุมตัวอย่างอย่างระมัดระวัง
·อาจเป็นเรื่องยากที่จะเห็นหลุมตัวอย่าง แต่ในส่วนที่เหลือก็ง่าย หากมีรูเกินสามารถทดสอบบัฟเฟอร์ตัวอย่างด้วย bromophenol blue