ข้อควรระวังสำหรับโพลีอะคริลาไมด์เจลอิเล็กโตรโฟรีซิส

· โพลีอะคริลาไมด์เจลต้องใช้โมโนเมอร์อะคริลาไมด์ วัสดุเริ่มต้นการเกิดปฏิกิริยาพอลิเมอไรเซชัน ตัวเร่งปฏิกิริยา และส่วนผสมเกลือและบัฟเฟอร์ที่เหมาะสมเข้าด้วยกัน

· อะคริลาไมด์และ BIS (N, N '- methylene double acrylamide) เป็นเมทริกซ์เจลรูปแบบโมโนเมอร์

· แอมโมเนียมเพอร์ซัลเฟตเริ่มกระบวนการโพลีเมอไรเซชันแบบยึดติด การสร้างกาวต้องใช้สารละลายแอมโมเนียมเพอร์ซัลเฟต 10% ที่เตรียมในน้ำ ข้อมูลส่วนใหญ่ระบุถึงความจำเป็นในการใช้งาน อย่างไรก็ตาม สามารถวางสารละลาย 10% ที่อุณหภูมิ 4°C เป็นเวลาหลายสัปดาห์ได้โดยไม่สูญเสียกิจกรรมอย่างมีนัยสำคัญ เติมได้มากถึง 10 มล. และทิ้งเมื่อกาวไม่จับตัวเป็นก้อน

เคล็ดลับ: เปอร์เซ็นต์ของอะคริลาไมด์ในการเรียงลำดับกาวและกาวโปรตีนไม่เหมือนกัน หากใช้อะคริลาไมด์สำเร็จรูป: สารละลาย BIS ตรวจสอบให้แน่ใจว่าได้ใช้ขวดที่ถูกต้อง

· TEMED (N, N, N ', N '- tetramethyl ethylenediamine) เป็นตัวเร่งปฏิกิริยาในขวดสีน้ำตาลวางไว้ในตู้เย็น เพิ่มก่อนที่จะเทกาว

· แก้วโพลีอะคริลาไมด์อิเล็กโตรโฟรีซิสที่ใช้ในอิเล็กโทรโฟรีซิสควรล้างก่อนและหลังแต่ละครั้ง หลังจากอิเล็กโตรโฟรีซิส ให้ล้างด้วยแปรงขนนุ่มและผ้าในน้ำสบู่ร้อน แล้วล้างออกด้วยน้ำกลั่น และพักให้แห้ง

· ความชื้นและฝุ่นอาจเกิดจากโพลีเมอร์กลวง ก่อนอิเล็กโตรโฟรีซิส ให้ทำความสะอาดแผ่นกระจกด้วยน้ำยาทำความสะอาดกระจก แล้วเช็ดด้วยแปรงขนอ่อน ล้างด้วยน้ำกลั่นและเช็ดให้แห้งด้วยกระดาษเช็ด การล้างด้วยเอทานอล 70% ก่อนเช็ดด้วยกระดาษจะช่วยทำความสะอาดและเร่งการแห้ง เติมตัวอย่างของอะคริลาไมด์อย่างต่อเนื่อง: BIS, น้ำ, สารละลายบัฟเฟอร์, แอมโมเนียมเพอร์ซัลเฟต, TEMED เขย่าให้เข้ากันแล้วเททันที

ไม่จำเป็นต้องกำจัดแก๊สโพลีอะคริลาไมด์ก่อนการเกิดปฏิกิริยาพอลิเมอไรเซชัน (เคยใส่อะคริลาไมด์ในสุญญากาศเพื่อขจัดฟองอากาศ เนื่องจากออกซิเจนยับยั้งการเกิดพอลิเมอไรเซชัน)

เคล็ดลับตัวอย่างจุดกาวแนวนอน

· วางกระดาษสีดำลงในกล่องด้านล่างพื้นหลังสีดำเพื่อให้รูตัวอย่างบางส่วนมองเห็นได้ชัดเจนยิ่งขึ้น
· บัฟเฟอร์เติมถังกาว เหนือคอลลอยด์
· ถ้าขอบมีไฟให้เปิดไฟให้แสงส่องคอลลอยด์ วาดตัวอย่างลงในปิเปต
· ใช้อุปกรณ์ปิเปตอัตโนมัติ
· ในจุดเคลื่อนที่ของของเหลวขนาด 10-200 mu 1 สามารถใช้กับจุดส่วนใหญ่บนตัวอย่างได้ สำหรับรูตัวอย่างที่เล็กมาก (น้อยกว่า 10μ1) หัวปิเปตแบบยาวที่ใช้สำหรับการหาลำดับกาวจะสะดวกกว่า

· การปิเปตเพียงแค่จุ่มลงในตัวอย่าง และสูดดมของเหลวที่เคลื่อนที่อย่างช้าๆ ตัวอย่างอาจดูเหนียวกับกลีเซอรีน และการปั๊มอย่างรวดเร็วอาจดึงฟองอากาศเข้าไปในหัวปิเปต

· ตัวอย่างหลังจากสูดดมหัวปิเปตแล้ว จะเคลื่อนหัวของเหลวเบา ๆ ไปที่ขอบท่อหรือเช็ดกระดาษดูดหัวของเหลวออกนอกหยด ระวังอย่าดูดตัวอย่าง

วางตัวอย่างลงในช่องเก็บตัวอย่าง

· อุปกรณ์ปิเปตเพื่อรักษาแรงดันเล็กน้อย ทำให้ตัวอย่างขยับหัวของเหลวล้นเล็กน้อย
· หัวปิเปตที่สอดเข้าไปในบัฟเฟอร์ ซึ่งสูงกว่ารูจุดเล็กน้อยเล็กน้อย จะรักษาแรงดันเชิงบวกไว้ สามารถสอดปลายปิเปตเข้าไปในรูเล็กๆ ได้
· ตัวอย่างออกมาอย่างช้าๆ และสม่ำเสมอ วางปิเปตทิปไว้เหนือรูตัวอย่างแบบจุด และตัวอย่างจะจมลงในรู ปล่อยให้ตัวอย่างจมลงไปจนเต็มรูตัวอย่างแทนที่จะดันเข้าไป
· เมื่อตัวอย่างที่มีหัวของเหลวหยดสุดท้าย ของเหลวจะเคลื่อนไปที่ขาที่สอง ค่อยๆ ยกของเหลวขึ้น เคลื่อนออกจากบัฟเฟอร์

วิธีการสุ่มตัวอย่างกาวแนวตั้ง?

· รูตัวอย่างจุดกาวแนวตั้งที่เกิดขึ้นระหว่างแก้วสองชิ้น ในกาวที่บางมาก ไม่สามารถแทรกหัวปิเปตระหว่างแผ่นกระจกสองแผ่นได้ ดูกลีเซอรีน! วางหัวปิเปตไว้เหนือรูตัวอย่าง จากนั้นตัวอย่างจะจมลงในรู
· จุดตัวอย่างก่อน ต้องแน่ใจว่าได้ใส่จุดแนวตั้งของรูตัวอย่างโพลีโพรพีลีนอะซิลเจลแล้วล้างออกให้สะอาด ล้างอะคริลาไมด์ที่ไม่ถูกโพลีเมอร์และน้ำที่อาจปรากฏที่ด้านล่างของรูตัวอย่างออกไป น้ำสามารถทำให้รูเก็บตัวอย่างมีขนาดเล็กลงอย่างมาก ใช้เข็มฉีดยาขนาด 25 มล. หรือ 50 มล. และเข็มขนาด 18 เกจ เทลงในบัฟเฟอร์อิเล็กโตรโฟรีซิส และล้างรูตัวอย่างอย่างระมัดระวัง
· การดูรูตัวอย่างอาจเป็นเรื่องยาก แต่ในขณะเดียวกัน ที่เหลือก็ง่าย หากมีรูมากเกินไป สามารถทดสอบบัฟเฟอร์ตัวอย่างด้วยโบรโมฟีนอลบลูได้